在福奇NIAID与石正丽武毒所之间拉皮条的生态健康主席Daszak提议在武汉制造具有SARS-CoV-2独特特征的病毒

美国科学家提议在武汉制造具有SARS-CoV-2独特特征的病毒

新文件描述了可能产生病毒罕见特性的实验。他们详细介绍了科学家对研究SARS-CoV-2等病毒的兴趣。（图片来源：Unspash）

根据美国获得的文件，美国科学家计划与武汉病毒研究所合作，在病毒从武汉出现前一年设计具有SARS-CoV-2特征的新型冠状病毒。知情权。

这些文件显示，虽然这些特征在自然界中很少见，但对于与武汉实验室合作的科学家的深奥研究兴趣来说，却是核心。

多年来，科学家们对所谓的“实验室泄漏”和自然起源假说存在分歧，他们一直在研究一项名为“DEFUSE”的美中研究提案中描述冠状病毒工程实验的晦涩语言。

DEFUSE 赠款提案由生态健康联盟主席 Peter Daszak 领导。

现在，通过《信息自由法》（Freedom of Information Act）发现的草稿和笔记揭示了有关预期研究的新细节。

具体来说，科学家们试图在刺突蛋白的 S1/S2 连接处插入弗林蛋白酶切割位点;将合成病毒组装成六个部分;鉴定与SARS相差25%的冠状病毒;并选择擅长感染人类受体的受体结合域。

SARS-CoV-2（导致 COVID-19 的病毒）的基因组与研究提案中描述的病毒相匹配：

• SARS-CoV-2 的弗林蛋白酶切割位点位于刺突蛋白的 S1/S2 连接处。弗林蛋白酶切割位点使病毒成为百年来最严重的大流行病原体。病毒学家尚未在任何其他相关冠状病毒中鉴定出一种。
• SARS-CoV-2 可通过限制性内切酶 Bsal 和 BsmBI 分为六个连续的基因组片段。这些限制性内切酶存在于自然界中，但也可以在实验室中用于剪接病毒。三位科学家在 2022 年的一项分析中估计，在自然界中看到 SARS-CoV-2 中发现的模式的可能性很小。这些限制性内切酶之一BsmBI的订单可以在文件中找到。
• SARS-CoV-2 具有高度传染性，但在人类中没有发生太多变化。该病毒“开箱即用，随时可以感染”。受体结合域似乎对人类ACE2受体进行了“微调”，但在首次溢出到人类时几乎没有遗传变异，这给试图证明它是自然出现的病毒学家提出了一个困难的“悖论”。这些文件证实，与武汉实验室合作的科学家在他们的研究中试图选择与人类ACE2结合良好的受体结合域。
• SARS-CoV-2 的基因组与 SARS 的遗传差异在 25% 的范围内。

这些文件首次披露，与武汉实验室合作的病毒学家计划设计新的刺突蛋白，这与该合作将整个刺突蛋白插入病毒骨架的公共工作形成鲜明对比。提案中的语言表明，这项工作可能涉及未发表的病毒，产生未发表的工程刺突蛋白。

美国病毒学家、北卡罗来纳大学教授拉尔夫·巴里克（Ralph Baric）计划每年设计20个或更多的“嵌合”SARS相关病毒刺突蛋白，以及2到5个全长工程SARS相关病毒。美国此前报告的文件知情权表明，一些实验可能在武汉秘密进行，其生物安全水平低于拨款中规定的水平，显然是为了节省成本。

这些文件挑战了美国国立卫生研究院（National Institutes of Health）和一些病毒学家提出的反对该研究提案与大流行起源相关性的论点。他们认为，这项中美科学合作只计划从公共文献中已有的病毒骨架开始设计病毒，而且这些病毒骨架太不同，无法在大流行中发挥作用。

然而，新文件显示，科学家们计划使用新的反向遗传学系统并在体内测试病毒 - 换句话说，设计具有新骨架的活病毒。

这些文件将资助中将要研究的SARS相关病毒描述为“一种新的类似SARS的大流行的明显而现实的危险”。

这些文件并不能证明SARS-CoV-2是如何在实验室中产生的精确分步说明手册。科学家们计划研究的一些SARS相关病毒的基因组仍然未知。但他们确实描述了可能产生病毒罕见特性的实验。他们详细介绍了科学家对研究SARS-CoV-2等病毒的兴趣。

该拨款提案已提交给国防高级研究计划局，但该局拒绝了该项目。该研究是否通过其他方式获得资助仍然未知。在提交提案时，Baric已经设计了未知的刺突蛋白。

尽管如此，这些文件表明，一个世纪以来最严重的大流行的一些核心数据不仅可能在中国，而且在美国也可以找到。

“当武汉病毒研究所发表第一篇关于大流行性病毒的论文时，他们没有提到独特的弗林蛋白酶切割位点，尽管他们最近撰写了DEFUSE，宣称他们正在寻找新型SARS样病毒的这些令人担忧的特征，”布罗德研究所分子生物学家Alina Chan说。“我们需要在2018年，特别是2019年（大流行之年）获得武汉病毒研究所与其美国合作者之间的所有交流。”

S1/S2 边界的弗林蛋白酶切割位点

虽然正式的DEFUSE提案的语言要求在称为“S2”的刺突蛋白的一部分中插入“人类特异性蛋白水解切割位点”，但DEFUSE的早期草案更为明确。

蛋白水解裂解位点是比弗林蛋白酶裂解位点更通用的术语。它指的是允许酶切割刺突蛋白的氨基酸组合，这有助于 SARS-CoV-2 等病毒进入人体细胞。但蛋白水解切割位点可以被多种酶激活，而不仅仅是弗林蛋白酶。

最终正式提案中的这一措辞一直是关于DEFUSE文件的辩论的症结所在。

斯克里普斯研究所病毒学家克里斯蒂安·安德森（Kristian Andersen）是自然起源理论的倡导者，他认为DEFUSE与COVID的起源关系不大，因为该赠款要求在刺突蛋白的S2′位置引入蛋白水解切割位点。

然而，早期的草案显示了科学家对弗林蛋白酶切割位点的特别兴趣。这些文件表明，科学家们还不确定其他切割位点的相对重要性。

早期的草案还精确地指定了预期插入的位置，包括与S1/S2交界处相对应的位置，而不仅仅是在S2′处。

“组织培养适应有时会引入弗林蛋白酶切割位点，该位点可以指导进入过程，通常是通过在其他冠状病毒的 S2' 中切割 757 和 900 位的 S，而不是 SARS，”该赠款写道。

位置 900 是 S2′ 站点，位置 757 是 S1/S2 站点。

对该提案的评论澄清说，该语言引用了巴里克的“图C”。

图 C 显示了 S1/S2 边界处的弗林蛋白酶切割位点，正是 SARS-CoV-2 中弗林蛋白酶切割位点的位置。

一些科学家说，这些文件表明，该研究小组已经找到了一种分离与SARS相关的冠状病毒或插入它们的方法。

限制性网站

一些支持自然起源理论的科学家认为，武汉实验室只会使用已发表文献中熟悉的骨架，并换掉了刺突蛋白。由于已发表文献中的这些骨干在基因上过于相似，无法产生SARS-CoV-2，因此他们认为DEFUSE的提议与大流行无关。

然而，更坦率的早期草案显示，研究人员计划在这些熟悉的骨架中测试工程刺突蛋白，作为初步测试，这将有助于他们优先考虑下一步的基因组：生成六部分合成病毒。

该小组以这种方式鉴定出具有“流行前潜力”的刺突蛋白将用于下一步，即生成“全基因组长度的活病毒”。

文件显示，DEFUSE背后的科学家提出了一种策略，使用六个片段将SARS相关的病毒基因组拼接在一起。

他们计划组装全长合成病毒。这些病毒将由共识序列组装而成，这些序列总结了一组密切相关病毒中最常见的碱基对。

这些病毒彼此之间可能有高达5%的核苷酸变异。RaTG13 是 SARS-CoV-2 的近亲病毒之一，由武汉病毒研究所测序，与 SARS-CoV-2 相差 4%。

“我们将确定最佳共识候选者，并使用商业供应商（例如BioBasic等）合成基因组，作为六个连续的cDNA片段，这些片段由独特的限制性核酸内切酶位点连接，这些位点不会干扰编码序列，但允许全长基因组组装，”该赠款指出。

这些文件显示，他们预计合成病毒会很便宜。

研究人员计划用这些全长合成病毒感染人源化肺细胞的小鼠。

新披露文件中的这种语言与 2022 年的一项分析相呼应，该分析揭示了两种限制性内切酶 BsmBI 和 BasI 的模式，将 SARS-CoV-2 病毒基因组分成六个偶数片段。科学家们估计，在自然界中观察到这种均匀分布的片段模式的可能性是极不可能的。

当时，它被安徒生斥为“幼儿园分子生物学”。

“许多病毒学家说，我们的分析是有缺陷的，声称目的一定是替换整个尖峰......或者几乎可以在任何冠状病毒基因组中找到类似的模式，“维尔茨堡大学分子免疫学家瓦伦丁·布鲁特尔（Valentin Bruttel）说，他是该分析的合著者。“正如我们假设的那样，他们计划使用6个片段来组装合成病毒。

新披露的文件还包括新英格兰生物实验室（New England Biolabs）对BsmBI的订单，BsmBI是这些关键的限制性内切酶之一。他们还计划购买其他未指明的限制性内切酶。New England Biolabs 还销售 BsaI 限制性内切酶，此外还有数百种其他产品。

在美国获得的文件的顺序中知情权，此预算表出现在一封电子邮件之后，USGS 该项目的合作者 Tonie Rocke 表示她的预算已附上。虽然罗克准备与巴里克合作，但目前尚不清楚她是否是这项基因工程工作的核心。

尽管如此，一些科学家表示，这一发现类似于支持实验室假设的“吸烟枪”。

但这一发现可能会引发争论。

在自然界中与SARS-CoV-2密切相关的病毒中，已经鉴定出一些在SARS-CoV-2中被确定为可能信号的相同限制性内切酶位点，这表明它们可能是重组而不是工程的结果。

受体结合域

与DEFUSE提案相关的电话会议的新记录显示，该研究小组对SARS相关冠状病毒感兴趣，这些冠状病毒类似于SARS-CoV-2，位于病毒基因组的关键部分，该部分附着在人体细胞上 - 受体结合域。

Baric 计划通过寻找擅长附着在人类 ACE2 受体上的切割位点和受体结合域来筛选具有流行潜力的受体结合域。

除了弗林蛋白酶切割位点外，SARS-CoV-2 几乎立即能够在人类中传播而无需太多进化——事实上它“适应得很好”——自大流行的最初几个月以来一直是可能起源于实验室的危险信号。

这些笔记还显示，Baric工程的刺突蛋白没有出现在公共科学文献中，并且这项工作可能已经在提交给DARPA时进行。

“RB [Ralph Baric] 已经从一组名为 293（S1）的蝙蝠病毒中产生了具有 RBD [受体结合域] 的 SARS 样嵌合体，该病毒与流行毒株有 20% 的差异，以及来自 HK3 的 S2 区域，差异为 20%，”笔记中写道，显然指的是由两种不同的蝙蝠病毒株产生的工程刺突蛋白。

虽然HKU3蝙蝠病毒是已知的，但“称为293的蝙蝠病毒”的提法是模棱两可的，似乎并不是指任何公共病毒群。

WIV的新型病毒

在提交资助提案时，武汉实验室采样的许多病毒都没有进行传播性或致病性评估。他们的基因组可能不是公开的。

“武汉病毒研究所团队将继续从中国南部蝙蝠洞的SARSr-CoV病毒中收集生物多样性调查，”文件写道。“他们收集了大量但不完整的SARSr-CoVs序列，其中大部分尚未评估其流行前的潜力。”

该资助提案的早期版本将武汉病毒研究所高级科学家石正丽的实验室确定为进行实验测试，尽管这最终被DARPA隐瞒了。

文件显示，除了在中国南方更广为人知的采样工作外，该研究小组在老挝还有一个蝙蝠病毒采样的热点。

科学家们还称他们的研究目标包括保护驻扎在东南亚的美国士兵。在老挝发现了一些与SARS-CoV-2最接近的病毒，包括一种名为Banal-20-52的病毒。

世卫组织专家成员彼得·达扎克（Peter Daszak）吹嘘自己在2016年在中国操纵了一种致命病毒的视频浮出水面，重新引发了人们对中国实验室正在制造新冠病毒的质疑。即使镜头对准了福奇为武汉实验室提供资金，尽管他继续否认新冠病毒起源于实验室的可能性。