（一）早期的研究的继续发展 1893年，瑞吉斯（E.Regis）用卵巢提出物给动物作皮下注射，发现它可使受阉割的雌性动物的子宫、阴道免於退化、萎蓿。 1896年，德国生物学家克劳尔（E.Knauer）等发现了卵巢的内分泌功能，他用狗作实验，证明移植卵巢可以防止阉割後的子宫萎缩。 同时，英国著名的生殖生理学家马绍尔(F.H.A.Marshall，他著的《生殖生理学》在1910年问世，是第一部生殖生理学专著)。1905年在伦敦皇家学会报告了题为《对哺乳类生殖生理学的一些贡献。第一部分∶卵巢是一个内分泌器官》的论文，预见到了卵巢的内分泌功能，报告中说∶“哺乳类卵巢除了产生成熟的卵子之外，还是一个内分泌器官，影响动物的全身代谢┅┅其分泌可能在所有时间或多或少地都有，但在重复出现的周期中的某些时候分泌量增多，引起了‘动情前期’和‘动情期’┅┅正是在这些时候┅卵子成熟，卵泡排卵，排卵之後，黄体形成，继续分泌，这一黄体的分泌对於妊娠第一阶段胚胎的著床和发育是不可缺少的”。马绍尔等不发现，引起动物出现动情期的卵巢分泌物（就是後来确定的“雌激素”）和黄体分泌物（指後来确定的“孕激素”）不一样。 1903年，福然克尔（L.Fraenker）发表了题为《黄体的功能》的论文，证明了黄体的存在对於维持早孕的重要性。 1905年马绍尔等发现，阉割的雌性动物如接受了卵巢提出液的注射，可使子宫、阴道重新出现动情期的变化。 虽然“内分泌”这个词是著名法国生理学家伯尔纳（Claude Bernard,1813-1878）早在1855年所创用的，但伯尔纳的“内分泌”这个词来指肝脏把葡萄糖直接释放到血液中去，与今天所指的内分泌腺分泌腺分泌激素并非一回事。现在所用的“激素”一词，是1905年英国生理学家斯他林（Starling）引入的，用来指他们在1902年发现的一种真正的激素——“促胰液素”之类的“化学信使”（这是斯他林当年用的原词）。 1909年潘德（N.Pende）创用“内分泌学”一词，指对内分泌腺及其分泌的激素的研究。正是“激素”和“内分泌学”等新的科学概念的形成和确立，促使了对柏尔陶德杰出工作的重新评价，也推动了对睾丸和卵巢内分泌功能的进一步研究。 二十世纪初，1901年布恩（P.Bouin）、斯泰纳赫(E.Steinach)等指出睾丸的“间质细胞”是分泌细胞；1903年罗瓦塞尔(G.Loisel)注意到间质细胞含脂肪颗粒，暗示睾丸内分泌物是脂类（甾体化合物如胆固醇等也可列入脂类）。1908年，瓦尔克尔(C.E.Walker)在英国《皇家医学会记录上》上发表了题为《睾丸对家禽第二性征的影响》的论文，他用公鸡睾丸的盐水浸出物重注射于正常的幼小母鸡体内，观察到鸡冠的生长，1911年，帕查(A.Pezard)证实了在睾丸提取物中含具有生理作用的物质，这就为布朗-塞卡1889年的发现提供了第一个客观证据。 然而，对於雄激素、雌激素和孕激素的突破属於进展，是十多年後，在二十世纪二十年代和三十年代出现的。 （二）得到了性激素的结晶 任何重大发现，既有它的发展过程——犹如“量”的积累，又有它的关键性突破——就是“质”的飞跃了。对於性激素的现代研究，突破性的重大飞跃，出现在本世纪的二十和三十年代。那时，对性激素的种种新发现，象雨後春笋般地涌现。 1923年，美国解剖学家E.(E.Allen,1892-1943)和生物化学家多伊西(E.A.Doisy)从大母猪卵巢的卵泡液中证实雌激素（当时称为“一种卵巢激素”）的存在，他们用小白鼠和大白鼠作实验动物，将其双侧卵巢切除，再皮下注射卵泡液，在第一次注射40-80小时後，所有动物均表现出完全的动情期（用阴道涂片和子宫、阴道的组织学检查证实）。 1925年，德国妇产科学家桑戴克（B.Zondek）等人，也从卵巢的卵泡中分离出“雌激素”（当时称为“卵巢激素”）。 1927年，阿什汉（S.Aschheim）和桑戴克发现孕妇中存在大量雌激素，并从孕妇尿中提取出雌激素。这一重要贡献常被誉为生殖内分泌学中划时代的发现。一年後，他们提出了妊娠诊断试验法，现在使用的诊断早孕的“青蛙试验”就是由此发展而来。 1927年，美国的麦克吉(L.C.MacGee)从牛的睾丸中提取出雄激素（当时称为“睾丸提取物”），证实它是脂溶性的，并将这一激素物质纯化和浓缩到了相当程度，以题为《睾丸取物的生物活性》的著作，作为他在芝加哥大学的博士论文。随後，进一步研究了这一睾丸提取物（“雄激素”）对附性器官和平共和第二性的作用。 1928年，德国的洛维(S.Loewe)等人发现尿中有雄激素。 1929年，美国的W.M.阿兰(W.M.Allen)，当时只有25岁，还是罗彻斯特大学的医学生，便作为该校解剖学教授柯纳（G.W.Corner）的合作者，完成了对黄体生理学的一系列研究。他们在1929年发表於《美国生理学杂?》的论文中，证实了孕激素（黄体酮，当时称为黄体提取物）的重要生理作用，文中说∶“黄体的提取物包含有一种特殊的激素，这种激素的功能之一在於引起子宫内膜增生，以使子宫作好受孕的准备。”他们用这种黄体提取物给切除了两侧卵巢的兔子注射，使兔子的妊娠以维持。美国的多伊西，德国哥丁根的布特南特（A.Butenandt），稍後（1930年），荷兰的拉阔尔(E.Laqueur)等，分别地从孕妇尿中提取出雌酮（一种雌激素）的结晶。 1930年，马利安(G.F.Marrian)，1931年，布特南特等从孕妇尿中得到雌三醇（一种雌激素）的结晶；这种物质布朗(Browne)在1930年也从人的胎盘中得到。 1931年，布特南特首先从男人尿中得到了头一个雄激素的结晶，不久之後，将此物质命名为“雄酮”。同年，布特南特指出了雌激素和胆固醇的关系。 1932年，美国的莫尔（C.R.Moore）等提出性激素生殖激素与月经周期的关系。 1934年，布特从人尿中提取出脱氢雄酮（一种雄激素）的结晶。 德、美等国布特南等；W.M阿兰等；哈特曼(M.Hartmann)等；斯簸洛特(K.H.Slotta)等四组科学家同时分别地先後得到黄体酮的结晶。 瑞士的卢吉卡(L.Ruzicka)人工合成雄酮获得成功，并确定了雄酮的结构式。 1935年，拉阔尔从公牛睾丸分离提纯睾丸酮，得到了睾丸酮的结晶。 大卫 (K.David)等人也成功地得到了睾丸酮的结晶。 布特南特和卢吉卡等分别地人工合成睾丸酮成功。事实上，在生物体分泌的睾丸酮结晶得到之前，布特南特等便胜利地将其人合成了。 温特斯泰纳(O.Wintersteiner)等从妊娠马尿中得到雌二醇，多伊西等从卵巢得过且过到雌二醇。雌二醇是人体内作用最强的雌激素。 到1935年为止，对於性激素的提取、纯化、确定化学结构成及进行人工合成便大体完成。[其中有几位诺贝尔奖的获得者∶如 1928, Adolf Windaus;1939 Adolf F. J. Butenandt,]从二十年代中期到三十年代中期这十年内，必一激素研究上的飞速发展有一个显著的特点∶ 不同的国家，那麽多研究工作者，不约而同地，几乎在大体相同的时间，独立地获得了同样的或类似乎的结果。这就极其有力地说明，科学技术的发现发明，决不是一两个人的智力的偶然创造，而是生产发展、条件成熟、众人努力的必然成果。事实上，在二十世纪二十到三十年代性激素的研究之所以得到突出的发展，至少和以下因素有关∶ 1）从十八世纪以来，特别是到了二十世纪初，人们对睾丸、卵巢的解剖生理学研究已有相当成就； 2）对睾丸提取物等有研究，在布朗-塞上的“返老还童”试验之後，受到了很大的推动； 3）激素和内分泌学的科学概念已经提出，这一新兴学科的出现，推动了对性腺内分泌物——性激素的研究，也为这种研究提供了更简明切的理论指导； 4）已经有了一种简便而准确的用於性激素实验研究的定性以至定量的测定方法。1917年，施托卡德（C.R.Stockard,1878-1939）和帕帕尼可劳（G.N.Papanicolaou,1883-19262）创用阴道涂片的方法观察 鼠的动情周期。紧接著，1920年，朗格（J.A.Long）伊万斯(H.M.Evans)将这种方法应用於大鼠，1922年，E.阿兰和多伊西应用於小白鼠，1923年，柯纳应用於猴子。很快地，主要实验动物的确定动情周期的阴道涂片法，都已建立。这种方法操作简便，对於鉴定雌激素、孕激素的作用，是一强有力的工具，大大推动了对性激素的科学研究； 5）1815年发现了胆固醇，开始了对甾体的研究。到二十世纪初，甾体化学已经建立，为性激素的提取、纯化、确定结构和人工合成，提供了很好的基础。最重要的甾体化学温道斯(A.D.R Windaus,1876-1959)年最重要的性激素研究家布特南特，都是德国哥丁根的科学家，他们还有承关系，布特南特是在温道斯的指导下获得博士学位的（1927年）。“甾体”这一有机化合物的名称，就是温斯在1903年提出的，用地芰皂宁（digitonin）能定量地沉淀多种甾体这一重要反应，也是温道斯在1909年发现的； 6）有机化学和有机合成工业的发展，为性激素的提取得性激素的人工合成提供了技术基础。而纯的结晶物的取得以及人工合成品的生产，又为对性激素的生理作用的实验研究和性激素的实践应用，提供了可靠的物质保证。 从性激素发现的现代史的简短回顾，可以看出，象对已有科学成就的学习和继承（如睾丸提取物研究的数以百年计的经验的吸取）；新的实验方法的创造和运用（如阴道涂片法）；注意吸取邻近域的新概念、新方法（如二十世纪初确立的甾体化学、内分泌学）；不同专业的科学工作的者的协作（如解剖学、组织学、生物化学、有机化学、内分泌学、生理学等方面的工作者在性激素研究中的互相配合）等等，都是导致性激素这项二十世纪生物一医学科学的重大发现的重要因素，也是值得我们吸取的历史经验。
