实验室美国学生连续做了三次co－IP，都没有成功，用的是前列腺癌细胞LNCaP。 这种细胞的重复性很差，长得相对其他的癌细胞慢，但是从来没有出现问题在western上。最后发现错误在于1.使用的RIPA lysis buffer 可能不对，加错了其他试剂。通常的配方是每30ml RIPA 加 Protease Inhibitor Cocktail 300ul0.5M NaF 300ul1M Sodium Orthovanadate (Vanadate, Na 3 VO 4 ) 6ul5M B-Glycerol phophate 300ul2. 细胞的密度决定加多少量lysis buffer100mm plate 70％以上的confluence 通常是用300ul lysis buffer， 太少，细胞不能全部裂解；太多，裂解液的蛋白浓度不够高，下一步的效果就受到限制。3. 通常IP的背景很脏，所以在洗的步骤要小心，洗3次以上，本实验室常用的是4次，背景很干净
